Ольга Прокофьева родилась 20 июня 1963 года в Одинцове Московской области. Актриса с детства мечтала выйти на сцену театра. Маленькая Ольга представляла себя балериной, завернувшись в занавеску и встав на кончики пальцев. В школе Ольга Прокофьева занималась в драматическом кружке, руководитель которого увидела у девочки талант и посоветовала поступать в Щукинское училище. С первого раза поступить в театральное училище не получилось. Но Ольга дала себе клятву, что обязательно поступит на актёрский факультет через год. Чтобы не сидеть зря дома, Прокофьева пошла работать, выбрав неожиданную для девушки, всю жизнь мечтавшей стать актрисой, профессию – бухгалтера на местном телеканале. Зато, работая на телевидении, будущая актриса не переставала готовиться к экзаменам, и об этом знали все ее родственники, друзья, знакомые и даже знакомые знакомых. Помогал Ольге готовиться к поступлению будущий медиамагнат и основатель телеканала НТВ, а тогда студент 4-го курса режиссёрского факультета Владимир Гусинский. Однако и вторая попытка успешно сдать вступительные экзамены не удалась. Тут уже преподаватели из приёмной комиссии, увидев неподдельное горе абитуриентки, у которой только что разбилась мечта всей её жизни, посоветовали попробовать себя в режиссуре. Так Ольга Прокофьева пошла учиться на курс знаменитого советского театрального режиссёра Андрея Гончарова. В 1985 году Прокофьева окончила ГИТИС с красным дипломом. В том же году она поступила в труппу театра имени Владимира Маяковского, в который пошли работать почти все её однокурсники. В 2000-х актриса параллельно играла в спектаклях других театров и антрепризах. Дебют в кино у Ольги Прокофьевой состоялся в 1987 году в фильме «Переход на летнее время». В фильмографии актрисы такие фильмы и телесериалы, как «Униженные и оскорблённые» (1991), «Воровка» (2001), «Остановка по требованию» (2001), «Дети Арбата» (2004), «Джек-пот для Золушки» (2004), «Адъютанты любви» (2005). Огромная известность пришла к Ольге Прокофьевой после исполнения ею одной из главных ролей в популярном ситкоме «Моя прекрасная няня» (2004-2008). После участия в сериале актрисе долго поступали предложения сыграть в подобном амплуа, но она вежливо отказывалась. Актриса снимается в основном в российских комедийных сериалах: «Московские каникулы» (1995), «В ожидании чуда» (2007), «Приключения солдата Чонкина» (2007), «Шекспиру и не снилось» (2007), «1703» (2022) и других. С 1989 по 2013 год Ольга Прокофьева озвучивала мультфильмы. В 2007-2009 годах вела программу «Домашние сказки» на телеканале «Домашний». В 2015 году снималась в киножурнале «Ералаш». В 2017 году стала одной из соведущих программы «Субботний вечер» на телеканале «Россия-1». В 2020 году стала постоянной участницей телеигры «Пятеро на одного». В 2020 году актриса сыграла главную роль в сериале «Need хелп». Яркие персонажи удались Прокофьевой в детективе «Анатомия убийства 3» и в мелодраме «Я знаю твои секреты. Хамелеон». В 2022 году актриса снялась в детективе «Я знаю твои секреты. Галатея», а в 2023-ем – «Я знаю твои секреты. Ребус Нины». В настоящее время Ольга Прокофьева продолжает сниматься в кино и играть роли в спектаклях своего любимого театра. На сцене, в кадре и в жизни Ольга Евгеньевна всегда выглядит элегантно и молодо. Зрители отмечают особую гибкость, которую актриса не теряет с годами.